Informazioni generali

Immunoanalisi enzimatica indiretta nella diagnosi di infezione da metapneumovirus del pollame Dmitriev, Denis Valerievich

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L'infezione da pneumovirus è una malattia respiratoria caratterizzata da processi infiammatori delle vie respiratorie superiori (passaggi nasali, trachea), seni infraorbitali, accompagnata da difficoltà di respirazione, starnuti, respiro sibilante, secrezione nasale. Il pneumovirus (APV), o più precisamente il metapneumovirus aviario, è la causa della grave malattia del tacchino (rinotracheite, TRT) e della "sindrome della testa gonfia" nei polli e nei polli. Negli Stati Uniti, questa malattia è rilevante solo per l'allevamento del tacchino, e circolano qui gli pneumovirus del sottotipo C, mentre in Europa dominano i sottotipi A e B, e la malattia è registrata nei tacchini, nei polli e nei fagiani. Infezione da APV o gonfiore della testa bilaterale. La mortalità di solito non supera l'1-2% e l'incidenza - 10%. La produzione di uova è spesso ridotta nel patrimonio della mandria.

Nella Federazione Russa, negli ultimi dieci anni è stata registrata un'infezione da pneumovirus più spesso negli allevamenti di carne. Principalmente nelle galline ovaiole, sebbene non sia esclusa la rilevazione di anticorpi specifici contro il virus nei volatili delle razze di uova.

La diagnostica viene effettuata mediante studi sierologici di sieri accoppiati da polli malati e sani in ELISA e mediante metodi di biologia molecolare per la rilevazione del genoma virale, nonché utilizzando studi virologici e batterici.

Prevenzione specifica all'estero e in alcune aziende della Federazione Russa vengono effettuati vaccini vivi e inattivati. Vaccinazione diffusa di pozioni di tacchino all'età di un giorno. Si nota l'interferenza tra i virus IBV e APV: il primo inibisce la replicazione del secondo nella trachea. Questo è di fondamentale importanza nella preparazione dei programmi di vaccinazione. La strategia di immunizzazione è simile a quella di IBC.

Un certo numero di fattorie usa con successo il vaccino domestico inattivato contro questa infezione. Il trattamento e la prevenzione della malattia negli uccelli con sindrome della testa gonfia possono essere efficaci solo con un'accurata diagnosi dell'agente eziologico che causa questa sindrome: un batterio o un pneumovirus o una combinazione di questi. L'infezione da pneumovirus è esacerbata da scarsa manutenzione (ventilazione impropria, eccessivo lavoro, cattiva alimentazione, cattiva alimentazione e igiene dell'acqua, mantenimento di uccelli di diverse età), debriefing e utilizzo di vaccini vivi contro la malattia di Newcastle e così via, se vengono effettuati durante il periodo di incubazione dell'infezione. Il trattamento con antibiotici ha un successo variabile, riducendo la gravità della malattia. L'antibiotico deve essere testato per la sensibilità del patogeno E. coli e ornitobacteria. Amoxyvillin, chloramphenicol, ampicillin, gentamicin, neomycin e altri sono usati. Attualmente sono disponibili vaccini inattivati ​​vivi, ma i risultati del loro uso non sono diretti (gli scienziati ritengono che ciò sia una conseguenza dei cambiamenti antigenici nei polli solitamente complicati da micoplasmi, E. coli, ornitobatteri). Senza sottovalutare il valore del patogeno come tipico patogeno respiratorio, è necessario sottolineare che il pneumovirus aviario per i polli non deve essere considerato come il fattore eziologico primario e più significativo. L'infezione da pneumovirus si trova principalmente negli allevamenti di polli da carne, principalmente nei polli degli allevamenti di genitori. Gli anticorpi del virus si trovano in molte aziende agricole, c'è una tendenza ad aumentare la loro individuazione nelle uova di pollame e, in genere, senza manifestazioni cliniche.

L'eziologia virale TRT è stata fondata nel 1985. La malattia è complicata da microflora secondaria ed è caratterizzata da elevata morbilità e mortalità. Lo stesso virus infetta i polli, in cui la malattia è associata alla sindrome della testa gonfia di un uccello nidificante ed è caratterizzata da una clinica respiratoria, letargia, aumento dei seni infraorbitali e pneumovirus unilaterali e interferenza di infezioni che agiscono simultaneamente).

Anemia virale di polli (sindrome emorragica, sindrome di anemia - dermatite, "ala blu")

Malattia virale dei giovani polli, caratterizzata da emorragie intracutanee e intramuscolari, lesioni necrotiche e atrofia del timo, della borsa e del tessuto linfoide. La malattia è causata da un virus DNA resistente della famiglia Circoviridae.

Ci sono due modi di infezione: verticale - attraverso l'uovo e orizzontale - per contatto, attraverso rifiuti e rifiuti quando viene beccato.

Allo stesso tempo, il virus ACV può essere integrato nel genoma del pollo (trasmissione verticale) e diffuso mediante iniezione del vaccino o direttamente nel vaccino.

Polli malati e indicazioni a base di uova. Tuttavia, l'uccello è più suscettibile alle infezioni della carne, in particolare i polli da carne, che è probabilmente correlata all'intensità dell'ingrasso.

L'agente eziologico della malattia è un virus della famiglia Parvoviridae contenente DNA, semplice organizzato, a forma icosaedrica, di 17-25 nm di diametro, contenente acido nucleico a filamento singolo. Esegue la sua riproduzione in colture di cellule linfoblastoidi. Induce la formazione nel corpo di polli infetti di anticorpi neutralizzanti, mentre i linfociti - neuro - epiteliotropici.

Il virus è resistente al cloroformio, all'etere, al pH-3 acido. A una temperatura di 80 ° C, l'inattivazione avviene entro 30 minuti e a 100 ° C dopo 15 minuti. Una soluzione al 5% di formaldeide inattiva il virus dopo 24 ore, ipoclorito di sodio al 5% e disinfettanti contenenti iodio alla stessa concentrazione, a 37 ° C per 2 ore, distrugge completamente il virus.

Il pollo è l'unico proprietario influenzato da ACV. I polli di 2-5 settimane di età sono i più sensibili alla malattia, principalmente i polli da carne, tra i quali l'incidenza può essere del 20-60%, il tasso di mortalità del 5-6%.

La fonte dell'agente causale dell'infezione sono polli malati e portatori di virus, che secernono il virus con gli escrementi, l'essudato sanguinoso dalle fessure della pelle colpita. L'infezione avviene in modo orizzontale e verticale, la principale via di infezione è un uovo da cova infetto. I fattori di trasmissione sono oggetti infetti di cura, mangimi e acqua.

Recentemente, è stato indicato che l'anemia dei pulcini e le associazioni di reovirus causano un decorso più grave della malattia. I fenomeni simili sono annotati con l'associazione di anemia infettiva con le malattie di Gumboro e Marek. L'emergenza dei primi focolai di anemia infettiva in Giappone e in Germania è associata all'immunizzazione del pollame contro la malattia di Marek contaminata dal virus dell'anemia infettiva.

Una volta nel corpo, il patogeno infetta le cellule ematopoietiche, viola il loro metabolismo, causando vacuolizzazione, formazione di inclusioni intranucleari e conglomerati di particelle simili a virus. L'eritropoiesi attiva viene ripresa solo il 20 ° giorno della malattia. Nei polli giovani, il virus dell'anemia causa anemia progressiva blastica, atrofia degli organi linfoidi, che è accompagnata da uno stato di immunodeficienza pronunciata. Il virus dell'anemia dei polli apre le porte a infezioni batteriche e virali secondarie e riduce notevolmente la risposta immunitaria alla vaccinazione contro la malattia di Marek.

Il periodo di incubazione è di 8-14 giorni. La malattia può essere lieve o asintomatica, a seconda dello stato del sistema immunitario.

Nei polli malati (direzione dell'uovo), c'è una grave depressione, mancanza di appetito, ritardo della crescita, esaurimento. Le mucose, la pelle, il pettine e gli orecchini sono pallidi, di colore bianco-giallo. La dermatite gangrenosa è spesso osservata. In questo caso, le lesioni focali della pelle sono localizzate nella testa, nelle ali, nel petto, nella coscia e nella tibia. Dalle fessure della pelle spesso deriva essudato sanguinoso. La dermatite è complicata dalla microflora secondaria.

I polli da 10-20 giorni si registrano: perdita di appetito, ritardo della crescita, stato comatoso, ali omesse, secrezione dal naso, pettine pallido, piumaggio umido e arruffato. Alcuni individui hanno le gambe gonfie e la testa, la diarrea appare poco prima della morte e si sviluppa una diarrea abbondante. Il tasso di mortalità inizia da 10 giorni e dura fino a 6 settimane di età. I sintomi di anemia sono registrati nel 100% dei casi.

La malattia si manifesta in due forme: clinicamente e subclinicamente. La forma clinica della malattia dei polli è una conseguenza dell'infezione primaria delle loro madri - che non hanno anticorpi nel sangue. La manifestazione clinica della malattia nei polli inizia il 10-14 ° giorno della loro vita e si manifesta con letargia, mucose anemiche, diarrea, dermatite gangrena. I vasi venosi delle ali sono sovraffollati, con il risultato che le emorragie sottocutanee sono blu. La pelle perde la sua elasticità, si spezza e attraverso di essa l'essudato sanguinoso viene rilasciato in superficie. La morte si verifica entro pochi giorni dopo l'insorgenza dei segni clinici. Con i segni clinici cancellati, lo spreco di polli varia dal 5 al 15% e nei casi acuti fino al 50-60%.

In una forma subclinica della malattia, l'agente patogeno viene trasmesso orizzontalmente. I polli di età pari o superiore a 3 settimane sono affetti, a causa della scomparsa dei loro anticorpi materni. Le forme cliniche e subcliniche dell'anemia infettiva dei polli sono immunosoppressive (soppressione dell'immunità), che aumenta significativamente la suscettibilità a determinati patogeni.

Quando vengono rivelate le autopsie, i seguenti cambiamenti si trovano nei pulcini:

1. Grave esaurimento

2. Dermatite settica, necrotica, dermatite gangrena sulle ali

3. Emorragie nei muscoli scheletrici e nella mucosa dello stomaco ghiandolare

4. edema sieroso di tessuto sottocutaneo nella testa e nelle gambe, alle estremità delle ali

5. Foci di necrosi nella milza

6. Bursa atrofia di Fabrizia e timo

7. Anemia e iperplasia renale

8. Atrofia del midollo osseo

9. Distrofia epatica con necrosi verdastra

10. Emorragie intramuscolari e sottocutanee

11. L'accumulo di essudato blu scuro sotto la pelle, specialmente alle estremità delle ali - la "ala blu".

La diagnosi di anemia virale dei polli viene effettuata sulla base di dati epidemiologici, segni clinici, alterazioni patologiche e risultati di laboratorio. Utilizzando il metodo di diagnostica sierologica basato sul metodo di immunofluorescenza indiretta (NIF), nonché un metodo altamente specifico per la determinazione nel sangue dei volatili di anticorpi a VAC mediante metodo immunologico (test Elisa). È possibile diagnosticare la malattia sulla base di uno studio del sangue dei polli malati il ​​12 ... 16 ° giorno dopo l'insorgenza della malattia - mentre l'ematocrito si riduce a 11 ... 20% a un tasso di 30 ... 40%. Questo è un metodo semplice ma specifico per la diagnosi di laboratorio dell'anemia di pollo, poiché altri agenti virali non causano tali cambiamenti nel sangue.

Trattamento. Attualmente in Germania ha ottenuto il vaccino con licenza "Timovak", che viene bevuto da un uccello una volta alle 13-18 settimane di età.

Immunità e prevenzione specifica.

Per creare una difesa immunitaria delle giovani calze, il metodo migliore è quello di indurre un'immunità transovariale congenita resistente nella prole mediante la vaccinazione degli allevatori di razza. La Germania ha già sviluppato un vaccino con il nome commerciale "Timovac", che è stato testato in molti paesi europei. La sua sicurezza ed efficacia sono mostrate. L'immunità transovarica protegge i polli dalla malattia durante le prime 3 settimane di vita.

Misure di prevenzione e controllo.

Le misure preventive dovrebbero essere complete, per impedire che l'agente patogeno venga trasportato nell'azienda avicola. Attualmente, la macellazione di uccelli sieropositivi è considerata una misura radicale per controllare e prevenire la malattia. Il piumino e la piuma ottenuti durante la macellazione degli uccelli in pollai disfunzionali vengono disinfettati a una temperatura di 85-90 ° C per 30 minuti. Lettiera e lettiera profonda disinfettano biotermicamente. Le misure da adottare devono garantire la riduzione della concentrazione epizootica, che impedirà la diffusione dell'agente patogeno oltre i suoi limiti.

Il danno economico durante un focolaio di una malattia è espresso nel 10-60% di mortalità e può essere la causa di una vaccinazione infruttuosa contro altre infezioni. Anche i costi elevati sono gli allevamenti di pollame nell'eliminazione della malattia.

Caratteristiche del genere M arpeitouksh famiglia Ragatuhoutske

Gli pneumovirus aviari sono costituiti da RNA, con un genoma negativo a filamento singolo non segmentato appartenente alla famiglia Paramyxoviridae della sottofamiglia Pneumovirinae del genere Metapneumovirus (Pringle, 1998, Lamb et al., 2000). Il genoma dell'RNA è costituito da otto geni con i loro prodotti organizzati nel seguente ordine: 3 -NPMF-M2-SH-GL-5, con una lunghezza totale di 13134 (AMPV sottotipo C) a 13378 (HMPV) nucleotidi (Ishiguro et al., 2004, Lwamba et al., 2005).

Il virus ha una struttura complessa ed è ricoperto da una membrana lipoproteica, che si forma quando il virione lascia. Forma principalmente particelle sferiche, simmetriche a spirale, che hanno dimensioni di 80-200 nm. Possono anche verificarsi virioni pleomorfi con un diametro di 150-200 nm e una lunghezza di 1000-10000 nm. Il nucleotide elicoidale ha una lunghezza di 14 nm.

Il guscio ricorda una frangia con sporgenze superficiali di 13-15 nm di lunghezza, che rappresentano 2-3 nm di larghezza alla base, massimo 3-5 nm, spaziatura compresa tra 2-3 nm picchi, tra cui emoagglutinina e neuraminidasi (HN) o emoagglutinina (H), o glicoproteina di superficie (G) e fusioni (glicoproteina F), coprendola uniformemente. Non c'è attività di emoagglutinazione in relazione agli eritrociti di polli, anatre, maiali, bovini e CBHHOK marini (Giraud et al., 1986, Baxter-Jones et al., 1987, Collins a. Gough, 1988, Buys et al., 1989, O Loan et al, 1992).

La massa molecolare del genoma è dello 0,5% in peso del virione e varia nel genere Pneumovirus entro 17-20 metri quadrati. Il genoma è solitamente monomerico o talora multiploide, non segmentato e contiene una singola molecola di RNA a singolo filamento lineare, polarità negativa, la sequenza interna di GAA segue la traduzione del segnale di avvio all'inizio del prossimo gene. I virioni possono anche contenere una copia polare positiva del genoma. La sequenza completa del genoma dell'RNA è 15200-15900 nucleotidi.

I pneumovirus degli uccelli non contengono geni NS non strutturali, che accorciano il genoma di 13.3 kv, e i suoi otto geni vanno nell'ordine di Z-NPM-F-M2-SH-GL-5 - caratteristiche del metapneumovirus di uccelli e umani (Ling, Easton, Pringle, 1992, Yu et al., 1992, Lamb et al., 2000). Tutti i geni contengono un frame di lettura aperto, ad eccezione di M2, che ha due frame di lettura sovrapposti che codificano 2 proteine: M2-1 (184-186 amminoacidi) e M2-2 (71-73 amminoacidi) (Yu et al., 1992) .

A causa della diversa organizzazione del gene e del basso livello (40%) dell'identità della sequenza rispetto al pneumovirus di mammifero, l'APV è stata assegnata al nuovo genere Metapneumovirus nella sottofamiglia Pneumovirinae (Pringle, 1999).

Le proteine ​​costituiscono circa il 75-80% in peso della particella. Il genoma virale codifica entità strutturali e non strutturali. I virioni contengono 7 proteine ​​strutturali presenti nel nucleocapside, nell'involucro, nella membrana e nella matrice. L'involucro virale include due proteine ​​di membrana incorporate. La struttura interna del pneumovirus è mostrata in fig. 1.

Surface Protein F svolge funzioni di attaccamento - questa è una proteina di fusione. Durante il processo post-traduzionale, viene sintetizzato all'interno della cellula infetta tagliando la proteina, il precursore per creare subunità legate al disolfuro virionico F1 e F2 (aMHH0-Fl-S-S-F2-Kap60Kcmi). È responsabile della combinazione con la cellula e la funzione emolitica (Kapczynski, Sellers, 2003), sebbene gli pneumovirus, diversamente da altri paramyxovirus, non possiedano attività di emoagglutinazione e neuraminidasi (Collins et al, 1996).

La scissione della proteina F in grande proteina F1 e piccola F2 media la fusione cellulare ed è necessaria per la diffusione del virus (Collins et al., 1996). Si presume che la parte terminale amminica di F1 sia coinvolta nella fusione di membrana ed è altamente conservata tra i tre tipi A, B e C del pneumovirus degli uccelli (Naylor et al., 1998, Seal, 2000, Seal et al., 2000).

La struttura organizzativa del genoma del pneumovirus dell'oca (oca isolata 15a / 01) è simile a quella dei ceppi AMPV / C dei tacchini. Tuttavia, il virus aveva un gene G largo, il più grande tra entrambi gli pneumovirus e i metapneumovirus (Bennett et al.2004). La dimensione della proteina G 15a / 01 (585 amminoacidi) era più del doppio della dimensione della proteina G di altri virus del sottotipo C e del metapneumovirus umano e più di 170 amminoacidi più grandi delle dimensioni delle proteine ​​G degli altri sottotipi di AMPV.

I sottotipi A, B, D AMPV circolanti in Europa hanno dimensioni paragonabili delle proteine ​​G (319, 414 e 389 amminoacidi, rispettivamente) e causano una gravità paragonabile della malattia, compresi i cambiamenti patologici nelle ciglia della mucosa nasale concha e lo sviluppo della sindrome della testa gonfia nei polli ( Pattison, Chettle, 1989, Gough, 1994, Maharaj, 1994, Shin et al., 2000). Questa relazione è stata confermata dall'analisi sequenziale del gene della proteina F (Naylor et al., 1998) e del gene M più conservativo (Randhawa et al., 1996). Sebbene diversi isolati di APV fossero antigenicamente simili, potevano essere divisi sierologicamente in due gruppi separati (Cook et al, 1993, Collins et al., 1993). Эта разница в вирусных белках объясняется различиями, обнаруживаемыми при использовании для серологических исследований разных антигенов (Senne et al., 1997).

Диагностика метапневмовирусной инфекции птиц

Диагноз на МПВИ птиц устанавливают на основании лабораторных исследований с учетом эпизоотологических данных, клинических признаков и патолого-анатомических изменений.

I segni clinici di MPVI nei tacchini e nei polli non sono patognomonici e, pertanto, è necessario utilizzare i metodi di diagnosi precoce e retrospettiva (IABorisova, 2008). La conferma della malattia dipende dall'evidenza della presenza del virus nel materiale clinico, dagli anticorpi specifici del virus nel siero del paziente e dagli uccelli malati. Di regola, l'isolamento del virus era molto più difficile per i polli che per i tacchini e la ragione di ciò non è chiara (Weisman et al., 1988, Jones, 1996, Catelli et al., 1998). Sebbene ci sia un messaggio da Taiwan (Lu et al., 1994) sull'isolamento del virus dai polli con la sindrome della testa gonfia.

Per l'isolamento primario del virus da materiale di campo di tacchini e polli, gli embrioni in via di sviluppo sono stati inoculati nel sacco vitellino (Giraud et al., 1988, Buys et al., 1989a, Panigrahy et al., 2000) o tracheale colture di organi (TOK) da embrioni di polli e tacchini (McDougall & Cook, 1986, Wilding et al., 1986, Wyeth et al., 1986, Giraud et al., 1988). Dopo 2 o 3 passaggi, gli autori hanno notato lesioni degli embrioni. Il liquido embrionale è stato inoculato in colture cellulari: cellule Vero (Buys et al., 1989a, Williams et al., 1991) o fibroblasti embrionali di pollo (Panigrahy et al., 2000). I ricercatori (Goyal et al., 2000) hanno identificato il sottotipo C MPV inizialmente nella coltura FEC, seguito dall'adattamento dell'isolato virale nelle cellule Vero.

Il sistema scelto per l'isolamento di MPV è la cultura degli organi tracheali (McDougall & Cook, 1986), che viene solitamente preparata da embrioni SPF di pollo, sebbene gli embrioni di tacchino siano anche adatti e abbiano uguale sensibilità (Naylor & Jones, 1994). Il metodo può richiedere molto tempo. Campioni freschi (tessuti o tamponi (tamponi)) del tratto respiratorio superiore passano fino a tre volte, durante l'esame di ciascun passaggio per ciliostasi fino a 11 giorni. Ci possono essere difficoltà nell'isolare il virus 6-7 giorni dopo l'infezione, poiché il materiale contenente virus può essere contaminato e il patogeno può essere identificato in modo definitivo con altri metodi, come la neutralizzazione virale o la colorazione immunofluorescente.

Usando TSC, il materiale è stato sottoposto a 4 passaggi "ciechi" con un intervallo di 3-4 giorni, esaminandoli per attività ciliare per 10 giorni (Cook et al., 2001).

Per l'infezione sperimentale, la colorazione immunofluorescente diretta o indiretta può essere utilizzata su passaggi tracheali o nasali, ma questa tecnica non è adatta per materiale da campo. Williams et al. (1991) hanno trovato una buona correlazione con l'isolamento e l'istopatologia del virus, e sebbene l'immunofluorescenza (IF) sia più rapida della secrezione, il suo valore nelle infezioni sul campo non è ancora stato valutato ed è anche possibile che il suo uso sia limitato a un periodo inferiore a una settimana dopo l'infezione.

Jones et al. (1988) hanno scoperto che IF è un metodo più sensibile rispetto all'isolamento del virus dai tacchini e fornisce risultati più rapidi (Majo et al., 1995, Jones, 1996). Catelli et al., 1998 hanno confrontato l'isolamento del virus con la colorazione con immunoperossidasi (PI) per il rilevamento di MPV nei polli infettati con SPF e ne hanno stabilito la superiorità.

Gli anticorpi sierici per Ml IB aviaria possono essere rilevati mediante immunofluorescenza indiretta, neutralizzazione virale ed ELISA (Baxter-Jones et al., 1986, 1989). L'immunofluorescenza indiretta è stata utilizzata con il siero proveniente da convalescenti prima che il virus potesse essere isolato su TSC. Questa tecnica è stata molto utile come test di screening iniziale (Baxter-Jones et al., 1986). La neutralizzazione virale è un test che richiede tempo e tempo. È stato usato per confrontare i ceppi in una reazione incrociata di neutralizzazione (Baxter-Jones et al., 1987) o per studiare i sieri di varie specie di uccelli per i quali non esistevano antiglobuline. Nella sierologia di routine, tali test sono stati soppiantati da ELISA (Grant et al., 1987, Chettle & Wyeth, 1988, Gerrard et al., 1990).

Valutazione della sensibilità e specificità del sistema di test sviluppato

Nell'ultimo decennio nella Federazione Russa, il numero di casi di infezione da metapneumovirus degli uccelli è aumentato.

Caratteristiche biologiche dell'agente patogeno (capacità di persistere e circolare tra gli uccelli sinantropici e migratori), presenza di 4 sottotipi di virus (A, B, C, D), uso di materiale riproduttivo senza tener conto della situazione epizootica in questa economia (equipaggio) , alta concentrazione di uccelli (spesso di diversi esemplari di età in un sito), imperfetta e / o non conformità con la tecnologia di coltivazione (spopolamento, microclima, disinfezione, ventilazione, densità di impianto, alimentazione). Il corso del processo infettivo causato dal MPV degli uccelli è complicato dalla presenza di vari agenti patogeni virali e batterici nelle fattorie. A questo proposito, la MPVI degli uccelli negli allevamenti di pollame è sia mono - (subclinica) che associata (complicata) infezione.

Durante il test del sistema di test sviluppato (registrazione di un virus da anticorpi specifici nel siero degli uccelli), abbiamo anche studiato la situazione epizootica in allevamenti avicoli di varie direzioni (11113, industriale), usando metodi virologici (isolamento e identificazione del virus) e batteriologici di ricerca.

In ciascuna azienda agricola è stata analizzata una situazione epizootica, sono state identificate le condizioni che hanno contribuito alla propagazione e alla riproduzione del patogeno, sono state determinate le fonti di infezione e sono state valutate le condizioni di alloggiamento, alimentazione degli uccelli e stoccaggio.

La mandria parentale delle aziende intervistate è completata da uova da cova e da allevamento giovani e / o di allevamento in cui è stata precedentemente registrata un'infezione da metapneumovirus e attualmente viene effettuata la vaccinazione preventiva del pollame con vaccini vivi e inattivati ​​di varie ditte (produttori).

CJSC "Nevskaya Poultry Farm" direzione dell'uovo (industriale), completato con giovani stock giornalieri dalla Finlandia. Sulla base di un esame clinico di una mandria adulta, è stata stabilita una soddisfacente condizione di galline ovaiole, la copertura di piume è liscia, lucida, le capesante e gli orecchini sono di colore rosso vivo, l'uccello è attivo, la produzione di uova è del 90-95%. In alcuni individui sono stati osservati disturbi respiratori (inalazione con becco aperto e collo allungato, respiro affannoso), gonfiore dei seni infraorbitali e spazio sottomandibolare.

All'autopsia di un uccello caduto di varie età, sono stati registrati i seguenti cambiamenti anatomopatologici: - nei polli fino a 10-15 giorni - tuorlo non assorbito, polmonite, enterite, - nelle galline ovaiole cadute 122-372 giorni - sinusite infraorbitale, rinite, tracheite emorragica, pericardite fibrinosa, enterite.

Tra i polli di età compresa tra 1 e 15 giorni, nel laboratorio di allevamento si osserva un aumento della pensione con sintomi respiratori.

Esame batteriologico delle colture di Escherichia coli (seni infraorbitali, polmoni) con proprietà adesive pronunciate e Salmonella spp. (cuore, fegato), che indica un'alta infezione di uccelli con Escherichia coli patogeno e Salmonella spp. e cattive condizioni igieniche.

Durante lo studio virologico, il metapneumovirus degli uccelli è stato isolato da un materiale patmateriale (teste affette, trachea e polmoni) di uccelli caduti in cellule Vero e fibroblasti embrionali di pollo.

Campioni di sieri di sangue di uccelli di diverse età (150-446 giorni) sono stati esaminati per la presenza di anticorpi specifici contro il metapneumovirus mediante ELISA utilizzando il sistema di test diagnostici sviluppato. I risultati della ricerca sono presentati in Fig. 5. I risultati dei test sierologici su campioni di siero di sangue di polli provenienti da un branco industriale del "Nevskaya" p / f della regione di Leningrado hanno mostrato alti titoli di anticorpi al MPV di uccelli e di età compresa tra 150 e 446 giorni erano da 5699 ± 822 a 11259 ± 948 con rilevamento al 100%, che indica la circolazione del virus nella mandria.

La direzione della carne di pollame "Tula Broiler" è completata con materiale di allevamento importato. Un esame clinico dei polli da carne, del bestiame giovane e dei genitori ha mostrato condizioni soddisfacenti. Tuttavia, sinusite infraorbitale, gonfiore dello spazio mascellare (testa gonfia) sono stati osservati in singoli individui di uccelli di diverse fasce di età (1,5-2%). L'autopsia patologica ha rivelato sinusite, congiuntivite, tracheite e polmonite.

Per gli studi di laboratorio sono state consegnate le teste colpite e i cadaveri di uccelli di diverse età.

Sono stati isolati gli esami batteriologici di gonfiore, teste, polmoni di polli, 12 colture di Escherichia coli, 5 colture di Staphylococcus aureus ed epidermidis e 2 colture di Proteus vulgaris.

Quando esame micoplasmatico di raschiature. dalla mucosa della trachea era: una coltura di M..gallisepticum è stata isolata e anticorpi sierologicamente verso il patogeno sono stati rilevati in titoli positivi dal 20 al 60% dei campioni studiati, H

Per condurre studi virologici, sono stati prelevati tamponi e raschiati dai seni infraorbitali muco, dal palato e dalla trachea, quindi sono state preparate delle sospensioni in soluzione di Hanks con antibiotici. Il materiale risultante è stato infettato da una coltura di cellule Vero e da una coltura di cellule di pollo e embrioni. Con passaggi successivi, è stato osservato un effetto citopatico intensificante nel monostrato della coltura, che è stato espresso arrotondando i kyets in aree limitate del monostrato, causando granularità citoplasmatica in essi, 3-4 giorni dopo l'infezione. La degenerazione cellulare al 70-80% è stata osservata per 6-7 giorni, quindi. in alcune aree, la formazione di sincizio è stata osservata come un segno caratteristico del JRS per il metapneumovirus degli uccelli.

Monitoraggio sierologico per l'infezione da metapneumovirus degli uccelli negli allevamenti avicoli in varie regioni della Federazione Russa

L'analisi dei dati della letteratura sull'ottimizzazione delle condizioni per l'ottenimento di immunosorbente attivo in fase solida per ELISA ha mostrato il significato della natura del polimero usato come fase solida (D.V. Maslov, 2006). È noto che il polistirene è caratterizzato da una maggiore capacità di assorbimento rispetto ad altri vettori (Herrman, Collins, 1976). Tuttavia, le lastre di polistirene estere e nazionali attualmente prodotte differiscono significativamente l'una dall'altra nelle loro caratteristiche di assorbimento. I dati della letteratura (GV Rezapkin et al., 1986) ei risultati delle nostre ricerche hanno dimostrato che le compresse domestiche (Lenmedpolymer, San Pietroburgo) hanno una bassa attività di assorbimento rispetto a quelle estere. Pertanto, per ottenere immunosorbente attivo in fase solida nel nostro lavoro utilizzato compresse di aziende straniere.

La diluizione di lavoro dell'antigene è stata determinata mediante il metodo della titolazione "sfalsata" sulla superficie dei pozzetti delle piastre di polistirene in soluzione salina tamponata con fosfato, pH = 7,3-7,5, per 16-18 ore a 4 ° C con diluizione dei sieri di controllo 1: 400. La dose sensibilizzante ottimale dell'antigene del metapneumovirus era una concentrazione di 6-8 μg per pozzetto. La diluizione di lavoro ottimale del coniugato commerciale liofilizzato è stata selezionata sperimentalmente. Nei nostri esperimenti, la diluizione di lavoro del coniugato era 1: 300-1: 400. L'ortofenilendiammina ("Sigma") è stata usata come substrato ad una concentrazione di 5 mg per 12 cm di tampone fosfato-citrato, pH = 4,9-5,0.

Durante la formulazione della reazione, il siero di controllo e di controllo, il coniugato è stato incubato in un termostato a 37 ° C per 30 minuti, poiché secondo la letteratura è noto che si instaura una costante di equilibrio tra l'antigene immobilizzato sulla superficie di polistirene e anticorpi e in uno stadio successivo tra il complesso immunitario risultante (antigene anticorpo) e coniugato si verifica quasi 30 minuti a 37 ° C (EH Gorbachev et al., 1988, DV Maslov, 2006).

Per eliminare interazioni non specifiche durante ELISA, vengono utilizzati sistemi tampone di lavaggio compresi detersivo non ionico (tween-20) e proteina immunologicamente inerte fino all'1-2% o, insieme al detergente, un'alta concentrazione di ioni caotropici C1 (VN Verbov, 1988, EH Gorbachev et al., 1988, DV Maslov, 2006). Abbiamo usato un tampone fosfato di potassio 0,01 M pH = 7,2-7,4, contenente 0,5 M NaCl con una concentrazione finale dello 0,1% del detergente del 20 °-20, che ha assicurato la specificità del dosaggio immunoenzimatico. Pertanto, gli studi condotti hanno permesso di ottimizzare le condizioni per la formulazione della reazione nel rilevare anticorpi specifici contro il metapneumovirus degli uccelli.

Il titolo diagnostico in ELISA è stato stabilito con il metodo della "titolazione degli scacchi" di vari sieri, iniziando con una diluizione di 1: 100, ad una concentrazione standard (6 μg per pozzetto) di antigene sorbed. L'analisi dei risultati ha mostrato che la diluizione di 1: 400 siero consente di non perdere il siero debolmente positivo. Allo stesso tempo, 20 sieri di sangue da allevamenti che erano sicuri per l'infezione da metapneumovirus degli uccelli erano negativi in ​​ELISA, il che conferma la specificità del sistema di test diagnostici sviluppato. A questo proposito, quando esaminiamo gli allevamenti di pollame per l'infezione da metapneumovirus, riteniamo che sia consigliabile iniziare la formulazione ELISA con diluizione del siero di 1: 100 e considerare la diluizione del siero del titolo diagnostico 1: 400 per l'infezione da metapneumovirus degli uccelli.

Per la determinazione quantitativa degli anticorpi contro il metapneumovirus degli uccelli nello studio dei sieri di sangue, offriamo un metodo di diluizioni seriali e un metodo di diluizione singola.

Per determinare il titolo finale dei sieri testati ad una singola diluizione, il metodo di analisi di regressione è stato utilizzato nel programma per computer Microsoft Excel. Sono stati eseguiti calcoli matematici per le diluizioni del siero di 1: 200, 1: 400 e 1: 800. I coefficienti di regressione lineare sono stati trovati per i valori di lg S / P e lg T (Tabella 3 e Fig. 4). È stato stabilito che il valore più alto del coefficiente di correlazione è stato determinato per la diluizione del siero di 1: 400, che è stata presa come quella di lavoro.

L'equazione di regressione lineare (lg T = 1,38 lg (S / P) + 3,54) per la diluizione del siero 1: 400 è stata utilizzata per calcolare il valore numerico del titolo. Si noti che l'equazione di regressione lineare ottenuta sarà affidabile per determinati valori della densità ottica di sieri di controllo negativi e positivi. Si è riscontrato che la gamma di parametri ottici (OD) del controllo negativo era compresa tra 0,088 e 0,160. I valori validi degli indicatori OP del controllo positivo erano compresi tra 0,504 e 0,751.

Per distinguere tra reazioni non specifiche, discutibili e specifiche, sono stati determinati i valori soglia del rapporto S / P. L'indicatore S / P, che corrispondeva al limite inferiore dell'intervallo di confidenza al 95% del campione studiato di valori di OD, è stato preso come valore soglia per la reazione negativa. Il punteggio S / P per la reazione negativa era 0,2. Il valore di soglia corrispondente alla reazione positiva attesa minima è stato considerato il valore S / P impostato per il limite superiore dell'intervallo di confidenza del 95%. Il valore di S / P per una reazione positiva era 0,24. I valori intermedi 0,21-0,23 corrispondevano alla zona dei risultati "dubbiosi".

Patogenesi del methapneumovirus

La trasmissione orizzontale del virus viene effettuata per contatto diretto o indiretto con secrezioni nasali e respiratorie da un uccello malato. Negli allevamenti di pollame e a casa, si osserva un alto livello di sieroprevalazione nel pollame produttivo.

Tuttavia, va notato che la presenza di elevati titoli anticorpali negli uccelli non è sempre accompagnata da sintomi clinici. Negli uccelli, il metapneumovirus si replica nel tratto respiratorio superiore di un uccello di qualsiasi età. Il virus può anche influenzare gli organi riproduttivi dell'uccello.

La replicazione dell'MPI si verifica nelle cellule dell'epitelio ciliato dei passaggi nasali e della trachea, causando deformazione e perdita delle ciglia della mucosa. Ciò contribuisce alla penetrazione attiva della microflora patogena secondaria, che complica e peggiora il corso del processo patologico.

24 ore dopo l'infezione, il virus può essere rilevato nella cavità nasale e nella trachea dell'uccello. La quantità massima di virus si accumula 3-6 giorni dopo l'infezione.

Molti scienziati nei loro studi hanno dimostrato l'esistenza di una protezione crociata dei ceppi vaccinali dell'infezione sperimentale dei sottotipi di metapneumovirus A e B. È stato dimostrato che l'influenza del sottotipo di metapneumovirus B ha impedito lo sviluppo di sintomi dopo un'infezione sperimentale con il sottotipo di virus A.

Si può ipotizzare che l'immunizzazione con ceppi del sottotipo B sia più efficace dei ceppi del sottotipo A. Inoltre, studi sul campo in diversi paesi indicano che il metapneumovirus di campo negli uccelli del sottotipo causa seri segni clinici ed è più complesso per quanto riguarda il controllo e l'attuazione dei programmi di vaccinazione.

Il periodo di incubazione nei tacchini, nelle galline ovaiole e nei greggi dei genitori dipende da vari fattori: pressione infettiva dell'agente patogeno di campo, problemi di gestione e sicurezza biologica, stress, problemi di salute e simili.

Le cose peggiori sono con i suddetti fattori, prima si può osservare lo sviluppo delle manifestazioni cliniche della malattia associate al metapneumovirus.

L'infezione da metapneumovirus è la causa dello sviluppo della sindrome della testa gonfia nei polli. Questa sindrome è caratterizzata dallo sviluppo di sintomi respiratori, apatia, gonfiore della testa, seni subglaciali e edema periorbitale unilaterale o bilaterale.

Эти симптомы часто сопровождаются церебральной дезориентацией, кривошеей, опистотонусом. Хотя смертность птицы обычно не превышает 1-2%, заболеваемость может достигать и 10%, а также негативно влияет на репродуктивные показатели птицы.

Клинические признаки метапневмовирусной болезни

Nei polli da carne i segni clinici sono caratterizzati da manifestazioni respiratorie all'età di 20-35 giorni e sono generalmente limitati al tratto respiratorio superiore (trachea, seni nasali). I sintomi più caratteristici di questa malattia sono: starnuti, tosse, secrezione nasale, congiuntivite e gonfiore dei seni paranasali.

L'infezione causata da MPO contribuisce allo sviluppo e alla manifestazione clinica delle infezioni respiratorie secondarie nei polli e nei tacchini, che è stata dimostrata usando un numero di agenti patogeni respiratori. Pertanto, il quadro clinico classico può essere complicato da infezioni batteriche secondarie, in genere E. coli, O. rhinotracheale, ecc.

Interruzione del sistema nervoso nei polli da carne dopo l'infezione con MPO è difficile da rilevare in un breve periodo di vita degli uccelli.

Infezioni secondarie e condizioni inadeguate di stabulazione del pollame sono i fattori determinanti per la gravità dei segni clinici. Particolarmente ben osservato nei polli da carne. Lo stress è un fattore scatenante nello sviluppo della maggior parte dei segni clinici della malattia, indipendentemente dal tipo di produzione di pollame. Tra questi fattori di stress, questi sono la massima produttività nelle galline ovaiole e nei greggi dei genitori, alta densità di impianto.

Nelle mandrie e negli strati parentali, i segni clinici del danno al sistema respiratorio durante l'infezione da metapneumovirus sono molto simili a quelli dei tacchini. Le manifestazioni classiche dell'effetto di MPO sul sistema riproduttivo dei polli sono una diminuzione della produzione di uova e un deterioramento della qualità del guscio d'uovo. Possono anche verificarsi sintomi nervosi, come torcicollo e opistotonus.

Nelle mandrie dei polli da ingrasso non vaccinati, oltre ai suddetti segni clinici, può svilupparsi anche l'osteomielite cranica. Ciò è dovuto alla diffusione di un'infezione batterica secondaria dell'orecchio medio. Tipicamente, lo sviluppo di segni clinici a strati e in branchi parentali è strettamente correlato all'insorgenza di un periodo di vita produttivo.

Questo è il motivo per cui è molto meno possibile rivelare un quadro clinico pronunciato di un'infezione da metapneumovirus durante il periodo di riproduzione del pollame. D'altra parte, stabilire se il contatto dell'uccello con l'IGO era abbastanza semplice attraverso l'uso di ELISA.

diagnostica

La diagnosi si basa su dati clinici, non è affidabile - può essere presa in considerazione solo come linea guida per la diagnosi differenziale. Quest'ultimo dovrebbe contenere la differenziazione di un gran numero di malattie respiratorie (micoplasmosi, ornitobatteriosi, bronchite infettiva, influenza aviaria a bassa patogenicità (LPAI).

La diagnosi finale dovrebbe essere fatta interpretando i risultati dei test di laboratorio - diagnostica sierologica e molecolare. Va notato che la diagnostica molecolare ha i suoi limiti. Ciò è dovuto al breve periodo di localizzazione del virus nei tessuti.

L'opzione migliore è l'uso simultaneo di diversi metodi di diagnosi della malattia. A seconda degli obiettivi e delle possibilità della ricerca di laboratorio, la diagnosi di infezione da metapneumovirus nei polli da carne può essere eseguita utilizzando i seguenti algoritmi:

Se possibile, utilizzare solo il metodo ELISA.

  • se le manifestazioni cliniche sono acute e si verificano nella 2-3ª settimana di vita, la selezione dei sieri di sangue viene effettuata ai primi segni clinici e 2-3 settimane dopo. È anche necessario differenziare la malattia di Newcastle, la bronchite infettiva,
  • quando si osservano problemi respiratori moderati durante il periodo di ingrasso e una diminuzione delle prestazioni di produzione alla fine dell'ingrasso, si raccomanda di prelevare campioni dagli uccelli per la macellazione.

Il campionamento per ELISA fino a 14 giorni di età deve essere evitato, poiché esiste la possibilità di rilevare anticorpi materni. L'eccezione è quando lo scopo del campionamento è quello di valutare gli anticorpi materni, quindi è preferibile prelevare campioni da un uccello all'età di 2-3 giorni.

Applicare ELISA e Molecular Diagnostics (PCR)

  • alle prime manifestazioni cliniche, devono essere prelevati campioni (tamponi dai seni nasali, trachea, seni periorbitali) per studi di PCR,
  • Non prelevare campioni da uccelli con gravi manifestazioni cliniche. Si raccomanda di selezionare il materiale per la ricerca da quegli individui di una mandria infetta, in cui i sintomi clinici sono stati rilevati nella fase iniziale,
  • per un test ELISA, i campioni di siero di pollame dovrebbero essere raccolti da questo stesso allevamento al momento dell'abbattimento.

Malattie virali effettive degli uccelli associate a lesioni del tratto respiratorio, diagnosi e prevenzione

La creazione di grandi aziende avicole dotate di moderne attrezzature consente alla zona limitata di crescere contemporaneamente fino a un milione o più di uccelli. La maggior parte delle imprese di pollame riduce le interruzioni sanitarie, reimballando il bestiame, il che porta alla "stanchezza" dei locali e all'accumulo di microflora patogena e batterica nell'ambiente. La tecnologia "tutto è vuoto - tutto è preso" è usato molto raramente. Fallimenti nella tecnologia di coltivazione, violazione delle norme veterinario-sanitarie, scarsa qualità dei mangimi, stress di diversa origine, hanno un effetto negativo sulla resistenza del corpo dell'uccello, portano ad un indebolimento del sistema immunitario e, di conseguenza, alla comparsa di malattie infettive di varie eziologie. La pratica di frequenti cambiamenti negli schemi di vaccinazione, lo spettro dei prodotti biologici, l'introduzione ingiustificata di nuove vaccinazioni nello schema e l'uso di vaccini vivi fatti sulla base di ceppi "caldi" e varianti, così come l'uso di vaccini a più stadi porta all'espansione dello spettro di microrganismi che circolano nell'economia. La vaccinazione di un uccello debole, un uccello che si trova in uno stato immunosoppressivo, infetto da qualsiasi agente patogeno, porta ad un aumento della virulenza dei virus di campo e causa un decorso subclinico di infezioni sullo sfondo del vaccino. Il decorso delle malattie infettive nelle forme subcliniche, latenti e associate rende difficile diagnosticare, prevenire ed eliminare le malattie. Di particolare rilievo sono le malattie infettive associate a lesioni del tratto respiratorio, in cui la trasmissione per via aerea porta alla rapida diffusione dell'infezione verso un numero significativo di pollame, indipendentemente dal sistema di stabulazione. Tra le nuove malattie per il nostro paese, questo gruppo dovrebbe includere l'infezione da metapneumovirus (MPVI), la bronchite infettiva dei polli (IBC) causata da ceppi varianti del virus IBC. La malattia di Newcastle (NB), la laringotracheite infettiva (ILT) e, ovviamente, l'influenza aviaria (SE) non perdono rilevanza. La diagnosi di ILT, NB, GP non è difficile, in contrasto con la diagnosi di MPVI e IB. Ciò è dovuto alla diversità dei ceppi virali, alle caratteristiche dei patogeni e al fatto che queste infezioni si verificano molto spesso in una forma associata ad altre infezioni virali e il loro decorso è sempre complicato dall'insorgenza di infezioni batteriche secondarie (secondarie), come colibacteriosi, micoplasmosi respiratoria, ornitobacteriosi. Rendono difficile valutare il quadro clinico ei segni patogenetici della micotossicosi (danni al fegato, ai reni), l'uso diffuso di antibiotici (nessun gonfiore dei seni e della testa), il decorso delle malattie sullo sfondo del vaccino e in associazione. A causa del fatto che le malattie sopra menzionate presentano una serie di sintomi simili, non è sufficiente condurre solo uno studio clinico e patologico-anatomico quando si effettua una diagnosi. Ad esempio, i segni clinici comuni per queste malattie sono la rinite, la congiuntivite, il gonfiore dei seni infraorbitali o della testa, per NB, HF e MPVI - segni nervosi. Tra i segni anatomopatologici, la tracheite, la polmonite o l'edema polmonare, la peritonite del tuorlo, i segni di complicanza con la microflora secondaria sono simili. Pertanto, la diagnostica dovrebbe sempre essere completa. Oltre alla ricerca clinica e autoptica, è necessario condurre test diagnostici di laboratorio, compresi studi sierologici e virologici. La reazione a catena della polimerasi (PCR) può essere utilizzata per digitare il patogeno. Tuttavia, va ricordato che solo la selezione del patogeno è la base per fare la diagnosi finale. Per la ricerca di laboratorio, è importante selezionare correttamente il materiale del brevetto. Il risultato dello studio e la sua informatività dipendono dai tempi del campionamento, dall'età dell'uccello durante il campionamento, dalla conformità del materiale brevettuale (organi, tessuti contenenti l'agente patogeno) alla diagnosi prevista, dal metodo di conservazione e dalle condizioni per la sua consegna al laboratorio. Pertanto, i campioni di siero per gli studi di monitoraggio dovrebbero essere selezionati in dinamica da un singolo allevamento. Il risultato più affidabile può essere ottenuto nello studio dei sieri accoppiati. Quando si verifica una malattia, vengono prelevati campioni di sangue al momento della prima manifestazione di segni clinici o patologici e dopo 14-21 giorni e, se necessario (ad esempio, quando il virus NB circola su un uccello adulto) ogni 14 giorni per 1,5-2 mesi. Il documento di accompagnamento dovrebbe indicare i tempi della vaccinazione e il nome dei biologici utilizzati nell'azienda avicola. Quando si eseguono studi per regolare il programma di vaccinazione, in particolare per i polli da carne, i campioni di sangue devono essere prelevati ad intervalli di 3-5 giorni da 1-3 giorni a 38-40 giorni al fine di seguire la dinamica di riduzione del livello di anticorpi materni, la formazione di post-vaccinazione immunità e tempistica di un possibile colpo in una mandria di virus sul campo. Quando si sviluppano schemi per la prevenzione di queste malattie, è necessario tenere conto della situazione epizootica in azienda, della situazione epizootica nelle fattorie che forniscono prodotti di razza, segni clinici e patologici, dei risultati di studi diagnostici (sierologici, virologici). Insieme all'adeguamento dello schema di vaccinazione in caso di malattia infettiva, è necessario identificare ed eliminare le carenze nelle misure veterinarie, nella produzione di pollame e nelle tecnologie di alimentazione, nel lavoro degli assistenti, poiché solo l'esecuzione di misure antiepizootiche nel complesso consentirà di eliminare l'epidemia e garantire che benessere del pollame. Quando si sviluppano schemi per la profilassi del vaccino delle infezioni respiratorie, la creazione di immunità locale (tessutale) negli uccelli, il rispetto delle priorità, durante le vaccinazioni, gli intervalli tra vaccinazioni, selezione dei metodi di vaccinazione, così come la compatibilità dei prodotti biologici con la loro introduzione simultanea sono di particolare importanza. La bronchite infettiva di pulcino è una malattia altamente contagiosa caratterizzata da lesioni delle vie respiratorie, così come il sistema genitourinario degli uccelli. L'agente eziologico di IBV è un virus contenente RNA appartenente alla famiglia dei Coronaviridae. Attualmente, più di 100 varianti di campo del virus sono state isolate e sierotipate. I polli di tutte le età sono malati, ma i polli sono più sensibili prima dei 30 giorni. Modi d'infezione - aerogenico, contatto, transovariale. I segni clinici nei polli di 1-30 giorni di età si manifestano con letargia, sonnolenza, deterioramento dell'appetito, rinite, sinusite, congiuntivite, secrezione di naso e occhi e respiro affannoso. I polli scuotono la testa, hanno difficoltà a respirare con un becco aperto. La mortalità può arrivare fino al 10-35%. Nei polli adulti si osservano lievi segni respiratori, una diminuzione della produzione di uova del 10-50%, la decolorazione del guscio d'uovo, la deformazione del guscio, il deterioramento della merce e le qualità di riproduzione delle uova. Va notato che nei polli adulti, IB attualmente si presenta in forma cancellata e i segni indicati, in particolare una diminuzione della produzione di uova, sono meno pronunciati. Anche la deformazione del guscio ("cintura", ecc.) È una piccola percentuale. I segni patologici della sindrome respiratoria sono rappresentati dalla presenza di essudato di muco sieroso nella cavità nasale, trachea, bronchi, accumulo di fibrina nell'area della biforcazione della trachea, edema polmonare. Quando la sindrome di nefrosi-nefrite: i reni sono ingrossati, gonfio, flaccido, con un modello eterogeneo dovuto all'accumulo di urati nei tubuli. Dopo la re-malattia, viene spesso rilevata atrofia dei lobi caudali dei reni o atrofia della destra, meno spesso del rene sinistro. Non ci sono danni ai polmoni. Negli uccelli adulti sono rilevati l'involuzione dell'ovaio, l'atresia dei follicoli maturi, la peritonite del tuorlo, la diminuzione della lunghezza e della massa dell'ovidotto e l'atrofia dei lobi caudali dei reni. Negli embrioni di pollo (CE), il virus IB provoca lesioni caratteristiche, come "nanismo" e torsione. Alcuni segni patopanatomici dell'IBC sono presentati nelle Figure 1-7: quando viene eseguita l'immunoprofilassi dell'IBC, è necessario ricordare che l'immunità locale è importante, che può essere assicurata utilizzando un metodo di vaccino a spruzzo vivo - a partire dal giorno prima. Quando si stabilisce la circolazione nella fattoria di ceppi varianti del virus IBV, è necessario introdurre la vaccinazione contro il ceppo variante, senza abolire la vaccinazione con l'uso del vaccino contenente il ceppo del Massachusetts. I tempi e la frequenza della vaccinazione dovrebbero essere determinati sulla base della situazione epizootica in famiglia, nonché tenendo conto dei risultati degli studi di laboratorio. Nelle galline ovaiole e nel pollame, la vaccinazione 2-4 volte viene effettuata con vaccino vivo e quindi inattivata. Quando si vaccina contro un ceppo variante del virus IBV, è necessario alternare i vaccini contenenti il ​​ceppo Massachusetts e il ceppo variante. Inoltre, il vaccino inattivato contro IB dovrebbe contenere anche due ceppi, vale a dire Ceppo del Massachusetts e ceppo variante. Solo in questo caso l'uccello può essere protetto dal ceppo variante del virus per l'intero periodo produttivo. Prima di utilizzare un vaccino vivo contenente un ceppo variante del virus IBV, è necessario condurre studi per determinare il ceppo circolante. I seguenti ceppi sono i più comuni:

It - 02 - ampiamente distribuito in Europa (Inghilterra, Germania, Francia, Spagna, Olanda),

D388 - Polonia, così come Belgio, Olanda, Italia, Francia, Russia, ecc. Ha un'omologia del 99% con QX,

QX - ceppo cinese (Germania, Russia, ecc.),

4/91 - negli ultimi anni si è diffuso in Russia.

Infezione da metapneumovirus degli uccelli: che cos'è e come combattere

Infezione da pneumovirus degli uccelli (tacchini da rinotracheite infettiva o TRT, sindrome di gonfiore della testa o SHS )

1. Introduzione
Alla fine degli anni '70, in Sud Africa si è verificata una nuova malattia respiratoria che si è verificata in tacchini di 3-4 settimane. Nell'uccello colpito sono stati osservati versamenti nasali e oculari, oltre a piccole infiammazioni dei seni infraorbitali.

Questa patologia differiva dalle malattie respiratorie precedentemente note con un alto livello di morbilità e mortalità. Gli scienziati Buys e Du Preez sono stati in grado di isolare il virus dall'essudato nasale dei tacchini colpiti e quindi riprodurre i sintomi della malattia in laboratorio, utilizzando l'isolato del virus da infettare.

Nel giugno 1985, la malattia fu registrata nel Regno Unito (Norfolk), da dove si diffuse rapidamente in altri paesi. Alla malattia è stato dato il nome di rinotracheite di tacchino (rinotracheite di tacchino. TRT). Durante lo studio dell'agente eziologico isolato durante i focolai della malattia, è stato riscontrato che la causa della malattia è un virus che, per le sue caratteristiche, è simile a un virus isolato in Sudafrica. Nel corso di ulteriori ricerche identificate. che il virus appartiene alla famiglia dei paramyxoviruses (Paramyxoviridae). al genere pneumovirus (Pneumovirus).

Verso la fine degli anni '70, in Sud Africa è stata segnalata una malattia respiratoria sconosciuta nei polli, accompagnata da sintomi respiratori e gonfiore nell'area della testa. Gli scienziati Morley e Thomson la chiamarono Sindrome di rigonfiamento della testa (sindrome della testa gonfia, SHS) e suggerirono che fosse causata da un'infezione mista causata da un coronavirus (Coronavirus) ed E. coli.

La sindrome del gonfiore della testa è stata riportata anche in vari paesi europei. La malattia si è verificata nelle mandrie dei genitori, così come negli strati e nei polli da carne. Vari agenti eziologici sono stati inclusi nell'elenco delle possibili cause di questa sindrome, ma nessuno di essi è stato dimostrato quando si cerca di riprodurre la malattia in via sperimentale.

Rilevazione di anticorpi contro il virus TRT nel siero e rilascio di particelle virali identiche al virus TRT. dal corpo di polli con segni di Sindrome, il gonfiore della testa ha portato alla convinzione che la TRT sia la causa di SHS. Più tardi, un certo numero di autori riportò l'isolamento del virus TRT dal pollame con sindrome della gonfiore della testa (SHS).

Anche se è stato dimostrato che il virus TRT è coinvolto nella formazione della sindrome della gonfiore della testa (SHS), attualmente ci sono ancora domande sulla patogenesi di questa malattia che richiede una risoluzione.

2. Eziologia
classificazione
Nella descrizione iniziale di questa malattia, gli scienziati Buys e Du Preez. ha dichiarato che il possibile agente eziologico è l'Oriomyxovirus o Paramyxovirus. Данное заключение было сделано с учетом морфологии возбудителя, которая была установлена в лабораторных условиях на трахеальной культуре.

После регистрации заболевания в Европе Wyeth с соавторами подтвердил, что вирус принадлежит к семейству Paramyxovirus, роду Pneumovirus, поскольку он не вызывает гемагглютинацию эритроцитов кур, морских свинок, человека (1 группа крови).

В более поздних исследованиях по изучению структурных полипептидов при помощи электрофореза в полиакриламидном геле и РНК вируса, было показано, что вирус TRT имеет сходную структуру с другими вирусами из рода Pneumovirus.

Il team di autori, guidato da Yu, ha dimostrato che la superficie rocciosa del virus TRT (polipeptide F e M) ha un'omologia del 50% quando studia la sequenza dei loro amminoacidi in confronto al virus dell'infezione respiratoria sinciziale umana, che conferma ancora una volta che il virus TRT appartiene al genere Pneumovirus .

Attualmente, il genere Pneumovirus è noto per rappresentare quattro virus: infezione respiratoria sinciziale umana, virus respiratorio sinciziale bovino bovino, virus della polmonite del topo e virus TRT. Poiché il virus TRT è l'unico membro del genere Pneumovirus che causa la malattia aviaria, ha ricevuto un altro nome: il pneumovirus aviario (Avian Pneumovirus, AGC).

Per quanto riguarda l'insorgenza della sindrome della gonfiore della testa (SHS), la teoria prevale sul fatto che il virus agisca come agente primario. In futuro, viene introdotta un'infezione batterica secondaria, che è rappresentata nella stragrande maggioranza di E. Coli e Pasteurella, che in condizioni favorevoli porta alla comparsa della sindrome di cui sopra.

morfologia
Il virus TRT è molto pleomorfo, può essere sferico o filamentoso. Il diametro delle particelle sferiche varia notevolmente e ha una dimensione da 80 a 200 nm e talvolta raggiunge i 500 nm. Le forme filamentose hanno un diametro da 80 a 100 nm e una lunghezza di 1.000 nm. Il virus ha una conchiglia rappresentata da uno strato lipidico con sporgenze sulla superficie, la cui lunghezza è di 13-14 nm. All'interno del guscio è presente un nucleocapside simmetrico a forma di spirale, il cui diametro è di 14 nm.
struttura

Foto 1. Virus TRT. Microscopia elettronica

Il genoma del virus è rappresentato da una singola molecola di RNA non segmentata con polarità negativa. Durante il sequenziamento, sono stati studiati i geni che codificano le principali proteine ​​del virus (F, M, G, M, SH, P, N). Questa informazione consente di analizzare i suoi vari isolati e di confrontarli con altri membri del genere del pneumovirus.

Il virus ha 9 polipeptidi, il cui peso molecolare varia da 14 Kda a 200 Kda.

Caratteristiche fisico-chimiche
Le proprietà fisico-chimiche del virus TRT sono tipiche per tutti i membri della famiglia Paramyxoviridae. Tuttavia, ci sono alcune caratteristiche:
• Il virus è sensibile agli effetti dei solventi lipidici organici (etere, cloroformio),
• Il virus è inattivato a 56 ° C per 30 minuti,
• Il virus è stabile a un pH compreso tra 3 e 9,
• La densità fluttuante nel gradiente di saccarosio è 1,21 g / cm3,
• Il virus non ha attività neuraminidasi,

Il virus non causa l'emoagglutinazione degli eritrociti di polli, oche, capre, porcellini d'India e umani (gruppo sanguigno 1).

Serotippirovanie
Nonostante tutti i ceppi del virus appartengano allo stesso sierotipo, due sottogruppi sono stati isolati utilizzando anticorpi monoclonali. La differenza viene stabilita sulla base del sequenziamento del gene polipeptidico G. Il sottogruppo A combina ceppi inglesi, sudafricani e alcuni francesi, mentre il sottogruppo B comprende ceppi spagnoli, italiani, ungheresi.

Caratterizzazione dei ceppi di virus TRT
Lo studio dei ceppi di tacchino e pollo dimostra l'identità delle caratteristiche morfologiche, fisico-chimiche e strutturali. Entrambi i ceppi inducono una risposta immunitaria in entrambe le specie di uccelli.

Tuttavia, il ceppo isolato dai polli causa i segni clinici della malattia sia nei polli che nei tacchini, e il ceppo isolato dai tacchini provoca la manifestazione della malattia solo nei tacchini.
Studi moderni che utilizzano anticorpi monoclonali indicano che la struttura antigenica dei virus isolati da entrambe le specie di uccelli è la stessa.

Caratterizzazione di agenti batterici secondari che complicano la TRT.
Durante la registrazione TRT, è stata isolata anche una microflora batterica diversa (Alcaligenes faecalis, Pasteurella multocida, Mycoplasma sp. E. coli, Staphylococcus) da un uccello malato. E. coli prevaleva tra i batteri isolati. Nel corso della ricerca degli scienziati Morley e Thomson, O'Brien, Pages e Costa, è emerso che quando si infettano con una coltura di E. coli pura per scarificazione nell'area del cuoio capelluto, si manifestano manifestazioni cliniche tipiche della sindrome del gonfiore della testa. Nel caso di infezione sperimentale simultanea con TRT ed E. coli, l'intensità della manifestazione clinica aumenta rispetto a quella dopo l'infezione separata con ciascuno degli agenti di cui sopra. I batteri E. coli, Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida sono più spesso isolati dagli adulti con sindrome del gonfiore della testa, che indica la loro importanza come agenti secondari nel caso di SHS.

Recentemente, Ornithobacterium rhinoatracheale (ORT) è stato aggiunto all'elenco degli agenti batterici secondari che complicano il decorso del TRT.

3. Epizootologia
diffusione
Come accennato in precedenza, i casi di TRT e manifestazioni di SHS sono stati segnalati per la prima volta in Sud Africa e poi in Europa. Oggi questa malattia si trova in tutti i paesi in cui si sviluppa l'allevamento di pollame industriale, ad eccezione dell'Australia. Negli Stati Uniti, queste malattie sono apparse di recente.
Morbilità e mortalità

TRT è una malattia contagiosa che porta ad alta morbilità e mortalità. A seconda della presenza di un'infezione batterica secondaria, il loro livello in alcuni casi può raggiungere il 30%. Questa malattia può verificarsi nelle aziende agricole sia con il sistema di produzione "tutto è vuoto, tutto è occupato", sia nelle fattorie che contengono uccelli non stagionati.

L'incidenza di SHS negli allevamenti di polli da carne può variare dall'1 al 10%. Il tasso di mortalità dipende da vari fattori. I livelli possono avere recidive di segni clinici, ma ogni caso successivo è meno pronunciato rispetto al precedente.

Non è stata identificata alcuna suscettibilità genetica all'uccello individuale per questa malattia. D'altra parte, le condizioni degli uccelli, così come la presenza di un'infezione batterica secondaria, influenzano significativamente i tassi di incidenza e di mortalità.

Modi di trasmissione
È noto che il contatto diretto svolge un ruolo significativo nella trasmissione di questo virus. Gli autori di Giraud, Cook, Williams descrivono la possibilità di trasmissione aerea. Per quanto riguarda la trasmissione verticale, non è noto quale sia il ruolo del virus TRT, che è localizzato nell'ovidotto.

suscettibilità
Tacchini, galline ovaiole e polli da carne sono soggetti a infezione da TRT.
I casi della malattia sono stati registrati in faraone, fagiani e pernici. I piccioni non sono sensibili al virus.

4. Patogenesi
Il virus si moltiplica nel tratto respiratorio superiore: nella cavità nasale, nella trachea, in misura minore nei polmoni e nelle borse delle vie aeree. Sono stati inoltre riportati casi di replicazione del virus negli organi riproduttivi dei tacchini dei gruppi di genitori. Dopo 24 ore, può essere rilevato nella cavità nasale e nella trachea, dove viene raggiunta la quantità massima di virus in 3-5 giorni.

Il virus può essere isolato dalla cavità nasale fino a 14 giorni dopo l'infezione. Usando la PCR, il genoma virale viene rilevato fino a 17 giorni dopo l'inoculazione. Il virus TRT ha un tropismo per le cellule dell'epitelio villoso della cavità nasale e della trachea, che porta alla distruzione e alla perdita di villi e contribuisce alla penetrazione della microflora secondaria.

Alla luce delle ultime conoscenze sulla patogenesi di questo virus, sono stati condotti studi utilizzando metodi istologici, immunocitochimici e microscopia elettronica per determinare la presenza del virus nelle condizioni delle fattorie. Per questo, sono stati selezionati 11 allevamenti di polli da carne, in cui è stata registrata la sindrome del gonfiore della testa. Campioni settimanali dalla cavità nasale e sacche d'aria sono stati raccolti dall'uccello.

Durante lo studio immunocitochimico ha rivelato la presenza del virus nell'epitelio dei passaggi nasali negli uccelli all'età di 2 settimane. Il test sul pollame in età avanzata era negativo. La microscopia elettronica ha confermato questi risultati rilevando inclusioni del Toro e danni ai villi.

Foto 2. Iperplasia e distruzione dell'epitelio della cavità nasale

Questi risultati sono stati integrati da studi istologici. In un uccello all'età di 3-4 settimane in un momento in cui il virus non è stato rilevato e le manifestazioni cliniche erano le più gravi, sono state riscontrate infiammazioni catarrali della mucosa nasale e sinusiti di gravità variabile.

È noto che il virus infetta l'uccello nelle prime settimane di vita e ha un breve periodo di viremia, distruggendo i villi e causando ciliostasi, che a sua volta "apre le porte dell'infezione" e promuove la colonizzazione della microflora batterica, che causa la sindrome del gonfiore. I tentativi infruttuosi di isolare il virus in caso di una sindrome di gonfiore della testa sono spiegati da un periodo estremamente breve di viremia nelle prime settimane di vita, poiché dal momento in cui compaiono i segni clinici, il virus è già assente.

Foto 3. Riduzione del lume del bronco a causa dell'infiammazione con infiltrazione linfocitaria

La conoscenza della patogenesi del virus dovrebbe essere presa in considerazione nello sviluppo e nell'attuazione di misure preventive e programmi di vaccinazione.

5. Segni clinici
In questa malattia, i segni clinici respiratori sono solitamente registrati. La malattia è accompagnata da versamenti nasali, starnuti, tosse e anche lievi gonfiore nella zona dello spazio mascellare. Dopo 2-3 giorni, l'uccello può manifestare congiuntivite purulenta e gonfiore nell'area della testa (SHS), che indica la presenza di complicanze causate da agenti patogeni batterici.

Gli uccelli da mandria di pollame possono subire una diminuzione dell'assunzione di cibo, la depressione si verifica entro 24-48 ore e il gonfiore appare nell'area della testa (sindrome del gonfiore della testa, SHS). Dopo 2-3 giorni l'uccello inizia a inclinarsi oa girare la testa. In uno studio di laboratorio è possibile rilevare l'osteoporosi settica, la cui dinamica è irreversibile.

Foto 4. Osteoporosi settica

Va notato che in alcune aziende agricole possono esserci casi di rilevamento di anticorpi contro il virus TRT senza mostrare alcun segno clinico della malattia.

In branchi di galline ovaiole commerciali, ci sono spesso casi di TRT quando le misure preventive non sono sufficientemente attuate. La loro malattia è accompagnata da sindrome del gonfiore della testa, versamento nasale, ovariite, nonché scolorimento del guscio nelle croci "marroni" dell'uccello.

Foto 5. Segni clinici di SHS negli uccelli dei parenti.

6. Cambiamenti patologici
Tra i cambiamenti macroscopici visibili più comuni nei tacchini sono: rinite o tracheite sierosa o purulenta. Ci può essere anche sinusite purulenta o caseosa, congiuntivite, blefarite.

Cambiamenti come aero saculite, polmonite, periepatite, pericardite possono verificarsi in caso di complicanze con microflora secondaria. Sono noti anche casi di salpingite in tacchini parenterali.

Infezioni sperimentali provocano la comparsa di rinite sierosa, sinusite singola o bilaterale in 2-3 giorni. Nei tacchini dei greggi dei genitori si possono osservare rinite sierosa o purulenta, salpingite, ovulazione addominale e ovariite.

Foto 6. Strato commerciale con segni di SHS


Foto 7. Turchia colpita dal virus TRT

Foto 8. Broiler con segni di SHS

Nei polli da carne infetti, possono esserci accumuli di masse caseose nei tessuti sottocutanei delle parti inferiori dello spazio mandibolare e orecchini, rinite minore, tracheite e sinusite. L'insorgenza di complicanze sotto forma di aerosolite, pericardite, periepatite fibrinosa può concludersi con la morte.

Nel caso in cui una sindrome di gonfiore della testa si verifichi in una gallina da allevamento commerciale o in un volatile del gruppo genitore, si verifica spesso un accumulo di masse caseose nel tessuto sottocutaneo. Possono verificarsi rinite, tracheite, ovariite, salpingite e scolorimento dei gusci d'uovo.

Cambiamenti microscopici
Durante lo studio dei cambiamenti microscopici nel citoplasma delle cellule epiteliali della cavità nasale e della trachea, vengono rilevati corpi di inclusione eosinofilici.

Nel tessuto sottocutaneo della testa si rivela l'infiammazione granuloma-infiammatoria, che può penetrare in profondità nel derma e nell'ipoderma. L'infiammazione ha la forma di un granuloma con un focus necrotico, circondato da colonie di bacilli Gram-negativi e un'area di infiammazione da cellule multinucleate epiteliali e giganti.

Nei casi cronici si incontra infiltrazione linfocitaria infiammatoria.

L'epitelio congiuntivale è di solito in uno stato di degenerazione e iperplasia. Esiste un'iperplasia del tessuto linfoide delle ghiandole lacrimali, perdita di villi che rivestono la superficie del tratto respiratorio, iperemia congestizia e anche accumulo di cellule linfoidi (nella forma di "noduli") nella membrana sottomucosa delle vie respiratorie.

Gli eterofili e la fibrina possono essere trovati sulla superficie del pericardio, del fegato e delle sacche d'aria.

Foto 9. inclusioni del Toro nelle cellule dell'epitelio della cavità nasale. Microscopia elettronica


Foto 10. Deformazione villosa. Microscopia elettronica

7. Diagnostica
La diagnosi viene eseguita in modo completo.

Segni clinici
Considerando solo i segni clinici. la diagnosi finale è impossibile. Deve essere confermato utilizzando altri metodi diagnostici. Va notato che la sindrome del gonfiore della testa (SHS) può verificarsi con una leggera pressione del virus TRT e, d'altra parte, un'infezione intensa con questo virus può verificarsi con una leggera manifestazione di SHS.

Rilascio del virus
Il mezzo più accettabile per l'isolamento del virus è la cultura dell'organo tracheale (CTO) degli embrioni di pollo o tacchino.

Va ricordato che il momento più ottimale per il rilascio del virus è l'inizio della comparsa dei primi segni clinici respiratori. Quando i segni clinici diventano evidenti, c'è il pericolo di isolare altri patogeni secondari che coesistono con il virus TRT.

Secondo gli scienziati Baxter-Jones e Jones, Alexander e Majo hanno scoperto che il periodo di massima diffusione del virus si verifica da 3 a 5 giorni dopo l'infezione, quando i segni clinici sono meno evidenti.

L'escrezione di virus dovrebbe essere dovuta a versamenti nasali. cavità nasali, contenuti di seni infraorbitali, trachea.

Studi sierologici
La reazione di immunofluorescenza indiretta (RNIF). Per la ricerca che usa questo metodo, usa il tessuto o il muco di un uccello o conduci uno studio sulla coltura cellulare TOK o Vero. infettato dal virus TRT. Il metodo RNIF può essere utilizzato per rilevare gli anticorpi contro il virus TRT.

Confrontando diversi metodi sierologici, un gruppo di autori guidati da O'Loan ha scoperto che il metodo ha la maggiore sensibilità quando lo mette in scena sulla coltura di cellule Vero.

Neutralization Reaction (PH). Questo metodo viene utilizzato per studiare le proprietà del virus TRT. Nella reazione vengono utilizzate colture cellulari diverse: CORRENTE. Vero, BGM, MA 104. CEF.

Saggio immunoassorbente legato all'enzima (ELISA). La diagnosi di TRT con questo metodo è descritta da un gruppo di ricercatori guidati da Grant. Attualmente, è noto che la specificità del metodo dipende dall'antigene utilizzato nel sistema di test.

Il metodo immunocitochimico è descritto dagli scienziati di O'Loan e Allan che hanno usato streptavidina-biotina-immunoperossidasi (IP) e sono stati in grado di rilevare l'antigene nelle cellule dell'apparato respiratorio e gli organi riproduttivi dell'uccello colpito. Questo metodo ha diversi vantaggi ed è usato nello studio della patogenicità del virus.

Molecular Diagnostics (PCR)

La diagnostica mediante PCR è stata sviluppata da un gruppo di scienziati guidati da Jing esaminando campioni di trachea ed esofago da un uccello infetto. Come risultato dell'amplificazione, è stato ottenuto un prodotto con un peso molecolare di 541 bp.

Questo metodo consente di rilevare un genoma virale specifico fino a 17 giorni dopo l'infezione.

Attualmente, la diagnosi molecolare di TRT è uno strumento estremamente importante per studiare la diffusione di questa malattia.

8. Prevenzione
Poiché la TRT è una malattia virale, la terapia antibiotica non può essere efficace. Tuttavia, il trattamento del pollame con antibiotici diventa rilevante se la microflora secondaria è coinvolta nel processo patologico.
vaccinazione

Fino a poco tempo fa, solo i vaccini inattivati ​​venivano usati per controllare la situazione di questa malattia, la cui efficacia era determinata mediante i metodi sierologici descritti sopra. La vaccinazione con Cxexta, che è stata raccomandata per i gruppi di genitori, comprendeva la duplice vaccinazione X10H0 - o vaccini inattivati ​​polivalenti di età compresa tra 12 e 18-19 settimane. Per i polli da carne, il vaccino è stato usato solo a scopo sperimentale. La vaccinazione dei tacchini ha suggerito l'uso di un vaccino combinato contro la TRT e la malattia di Newcastle.

Attualmente, lo schema di vaccinazione per greggi parenterali e vettori commerciali include la vaccinazione vaccinale in tempo reale seguita dalla rivaccinazione con un vaccino inattivato. Per i polli da carne e i tacchini nelle fattorie disfunzionali usare il vaccino vivo.

Il livello di protezione umorale dopo la somministrazione del vaccino vivo è basso. Tuttavia, è stato dimostrato sperimentalmente che anche con un basso livello di anticorpi anti-vaccinazione umorale, l'uccello è immune alla malattia.

Nonostante la diversità antigenica esistente di questo virus, secondo Cook, i moderni vaccini forniscono una protezione efficace.

Non è raccomandato l'uso di vaccini vivi in ​​combinazione con altri vaccini (ND), poiché possono inibire la replicazione del virus vaccinale e impedire la formazione della risposta immunitaria.

Cos'è il metapneumovirus negli uccelli

Il metapneumovirus aviario (MISP) è l'agente eziologico della rinotracheite infettiva negli uccelli, nonché la causa della sindrome della testa gonfia (SHS). Fu registrato per la prima volta nel 1970 in Sud Africa, ma fino ad oggi non è stato registrato ufficialmente in alcuni paesi. Изначально считали, что это заболевание имеет бактериальную природу, однако позднее при помощи исследования эмбрионов птиц и фрагментов тканей из трахеи, выделили этиологический агент TRT, идентифицировав его как вирус. Inizialmente, è stato classificato come una classe di pneumovirus, ma dopo la scoperta di forme virali simili ad esso, è stato riqualificato in un metapneumovirus.

Come si verifica l'infezione?

L'infezione da questo virus si verifica orizzontalmente (da un individuo all'altro attraverso l'aria o le secrezioni). La principale modalità di trasmissione è il contatto diretto degli uccelli infetti e sani (attraverso lo starnuto, l'infezione sale sul cibo, le penne degli altri uccelli). L'acqua e il mangime possono anche fungere da portatori temporanei (la tensione nell'ambiente esterno diventa instabile, quindi non vive al di fuori del corpo per molto tempo).

Esiste la possibilità della sua trasmissione verticale (dalla madre ai discendenti). Il virus del methapneumovirus è stato trovato sui polli appena nati, che indica la possibilità di infezione delle uova. Anche le persone possono contribuire all'ulteriore trasmissione del virus spostandolo sulle scarpe e sui vestiti.

Che cosa colpisce un uccello da fattoria

Inizialmente, il virus è stato visto nei tacchini. Ma oggi l'elenco delle possibili specie di uccelli sensibili a questa malattia è aumentato significativamente e include:

Una volta nel corpo, il virus inizia a proliferare attivamente sulle cellule epiteliali delle vie respiratorie, causando la sua attività a perdere le ciglia dall'epitelio. A sua volta, la mucosa, priva di queste ciglia, non è in grado di sopportare infezioni secondarie che, penetrando nel corpo, riducono la lotta già inefficace del corpo contro il metapneumovirus.

Sintomi clinici

I segni classici di un metapneumovirus sono starnuti, tosse, secrezione mucosa nasale e gonfiore della testa e congiuntivite. Poiché questo virus è accompagnato da malattie respiratorie, i sintomi saranno molto simili a loro. Nel tempo, l'effetto del virus sul corpo dell'uccello si diffonde ai sistemi riproduttivo e nervoso.

L'uccello cessa di funzionare, o la qualità delle sue uova diminuisce in modo significativo - il guscio si deteriora. L'effetto del virus sul sistema nervoso può essere notato attirando l'attenzione su sintomi come il torcicollo e l'opistotono (postura convulsa con arcata posteriore e testa abbassata all'indietro).

Uso combinato di ELISA e PCR

Per l'analisi simultanea con due metodi, ai primi segni della malattia, campioni del materiale (strisci) vengono prelevati dai seni e dalla trachea per l'analisi della PCR. In caso di gravi sintomi della malattia, il campionamento non è raccomandato. È necessario scegliere individui con una moderata manifestazione di sintomi. Per l'analisi ELISA, il sangue viene raccolto da individui nella stessa mandria. Ciò consente di scoprire se l'uccello ha già avuto contatti con questo virus.

Interpretazione dei risultati di laboratorio

Per la formulazione della diagnosi corretta è necessaria una diagnosi sierologica e molecolare dei dati. Il primo studio si propone di identificare gli anticorpi prodotti dall'organismo per combattere il virus. Il secondo tipo di diagnosi è progettato per identificare l'agente eziologico della malattia su vari campioni biologici.

Metodo di controllo e vaccinazione

Si raccomanda l'uso di vaccini vivi contro questo virus. Inattivati ​​non si applicano perché mostrano bassa efficienza negli animali giovani, causano un aumento del livello di stress dell'uccello che, a sua volta, influenza la sua produttività e sviluppo. Il vantaggio dei vaccini vivi è che essi formano l'immunità locale nel tratto respiratorio superiore.

Garantire una protezione adeguata

Al fine di proteggere la mandria di uccelli da questa infezione, è necessario effettuare una vaccinazione tempestiva, così come dovrebbero essere mantenute le seguenti norme: densità di impianto, pulizia dei locali e controllo della qualità dei mangimi. Vale la pena ricordare che il metapneumovirus viene efficacemente eliminato nelle prime fasi della diagnosi, pertanto, ai primissimi sospetti, è necessario condurre tutti gli studi necessari per formulare una diagnosi e adottare misure per eliminare efficacemente il virus.

Metodo di controllo del metapneumovirus nei polli da carne

Il principale problema associato all'MPO nei polli da carne è la sintomatologia respiratoria. Per combattere questa infezione nei polli da carne, la vaccinazione con i vaccini vivi è efficace.

L'uso di vaccini MPO inattivati ​​non è raccomandato per diversi motivi:

  • esso comporta un rischio per la qualità della carcassa sul fondo a causa di residui non assorbiti del vaccino,
  • il processo di vaccinazione con vaccini inattivati ​​e la vaccinazione di giovani polli con vaccini oleosi causa stress, che influenza la crescita degli uccelli e l'uniformità del lotto,
  • Le immunoglobuline di classe Y (IgY) sono generate solo da vaccini inattivati ​​o anticorpi materni. Hanno mostrato bassa efficacia nel prevenire l'infezione del tratto respiratorio nelle pozzanghere e nei polli di un giorno dopo l'infezione con ceppi virali MPO,
  • Il metapneumovirus negli uccelli può infettare gli uccelli con alti titoli di anticorpi materni,
  • Sebbene gli anticorpi materni possano limitare la replicazione e l'escrezione virali, non impediscono il danneggiamento del tratto respiratorio superiore. Ciò è spiegato dal fatto che gli anticorpi materni funzionano durante il periodo di viremia, che è già osservato dopo lo sviluppo di cambiamenti patologici nelle vie respiratorie dell'uccello.

L'efficacia dei vaccini vivi consiste principalmente nella formazione di immunità locale nel tratto respiratorio superiore, che viene generata nei tessuti bersaglio. Questa immunità si basa sul lavoro dell'immunità cellulo-mediata e sulla produzione di immunoglobuline secretorie di classe A (sIgA) nella mucosa.

Considerando che la formazione dell'immunità locale nei tessuti bersaglio è la più importante, il metodo di scelta per la vaccinazione è l'introduzione diretta del vaccino nel bersaglio per la replicazione del virus nel tessuto.

In questo caso, per la formazione dell'immunità locale nel tratto respiratorio superiore, i migliori metodi di vaccinazione con un vaccino vivo contro il metapneumovirus sono la vaccinazione intraoculare o uno spray a spruzzo grande.

Questo conclude la storia della malattia Metapneumovirus negli uccelli e metodi di diagnosi, vaccinazione con vaccini vivi.

Buona fortuna a tutti e salute al tuo pennuto!


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